Test de Barbitúricos

PRUEBA DE BARBITURICOS EN UN SOLO PASO EN PLACA (ORINA)
 
USO INDICADO
La Prueba BAR de Barbitúricos en Un Solo Paso en Placa (Orina) es un inmunoensayo cromatográfico de flujo lateral para la detección de Barbitúricos en orina humana en concentraciones del cut-off de 300 ng/ml de Secobarbital. Esta prueba detecta también otros compuestos relacionados con los Barbitúricos para lo que puede dirigirse a la relación que aparece en el apartado de Especificidad.
Esta técnica únicamente proporciona un resultado analítico preliminar cualitativo. Para obtener la confirmación de un resultado debe emplearse un método químico alternativo más específico. El método preferido para confirmación, es el GC/MS (Cromatografía gaseosa/Espectrometría de masas). La consideración clínica y el buen juicio profesional deben aplicarse a cualquier resultado de prueba de drogas de abuso, en particular cuando se utilizan resultados preliminares positivos.
 
 
RESUMEN
Los Barbitúricos son depresores del sistema nervioso central. Se emplean terapéuticamente como sedantes, hipnóticos y anticonvulsionantes. Los Barbitúricos casi siempre se toman por vía oral en forma de cápsulas o tabletas. Los efectos por su consumo se parecen a los de los estados de embriaguez debidos al alcohol. El uso continuado de Barbitúricos lleva a la tolerancia y la dependencia física. La ingestión de 400 mg/día de Barbitúricos durante 2-3 meses produce un grado significativo de dependencia. Los síntomas de su retirada, que se experimentan durante periodos de abstinencia de droga, pueden ser lo suficientemente severos como para causar la muerte. Sólo una cantidad pequeña (menos del 5%) de la mayoría de los Barbitúricos se excretan sin alterar en la orina. El periodo en el que se detecta en la orina el consumo de Barbitúricos es de 4-7 días.
La Prueba BAR de Barbitúricos en Un Solo Paso en Placa (Orina) es una prueba rápida que puede realizarse sin necesidad de utilizar ningún aparato. Utiliza anticuerpos monoclonales para detectar de manera selectiva niveles elevados de Barbitúricos en orina y origina resultados positivos cuando la presencia de Barbitúricos en la orina supera el nivel del cut-off de 300 ng/ml.
 
 
PRINCIPIO
La Prueba BAR de Barbitúricos en Un Solo Paso en Placa (Orina) es un inmunoensayo cromatográfico rápido basado en el principio de uniones competitivas. La droga puede estar presente en la muestra de orina, compite frente al conjugado de la misma en los puntos de unión al anticuerpo.Durante la prueba, la muestra de orina migra hacia arriba por acción capilar. Si los Barbitúricos están presentes en la orina en concentraciones inferiores a 300 ng/ml, no saturarán los puntos de unión de los anticuerpos en la placa de la prueba. Las partículas recubiertas de anticuerpos serán capturadas por el conjugado inmovilizado de proteína-Barbitúrico y una línea visible de color aparecerá en la zona de la prueba. Esta línea de color no se formará en la zona de la prueba si el nivel de Barbitúrico está por encima de 300 ng/ml porque saturará todos los puntos de unión de los anticuerpos de anti-Barbitúricos. Una muestra de orina positiva no generará una línea coloreada en la zona prueba debido a la competencia de la droga, mientras que una muestra de orina negativa o una muestra con una concentración inferior a la del cut-off generará una línea en la zona de la prueba. Para servir como procedimiento de control, una línea coloreada aparecerá siempre en la zona de control si la prueba ha sido realizada correctamente y con un volumen adecuado de muestra.
 
 
REACTIVOS
La prueba contiene anticuerpos monoclonales de ratón anti-Barbitúricos unidos a partículas y conjugados de proteína-Barbitúricos. Un anticuerpo de cabra se emplea en el sistema de la línea del control.
Almacenamiento y Estabilidad
Almacenar tal como está empaquetado en la bolsa sellada a temperatura ambiente o refrigerado (2-30°C). La placa de análisis es estable hasta la fecha de caducidad que figura en la bolsa. La placa de análisis se mantendrá en la bolsa sellada hasta su uso. NO CONGELAR. No utilizar después de la fecha de caducidad.
 
 
OBTENCION Y PREPARACION DE LA MUESTRA
Valoración y obtención de la muestra:
• Se debe tomar la muestra de orina en un envase limpio y seco. Se pueden usar muestras de orina recogidas en cualquier momento del día. Aquellas muestras que presenten partículas visibles deberían ser centrifugadas, filtradas o permitir que sedimenten para obtener una muestra clara para realizar la prueba.
Almacenamiento de las Muestras:
• Las muestras de orina pueden ser almacenadas entre 2 y 8ºC hasta 48 horas previas a la realización de la prueba. Para un periodo más prolongado se deben congelar a -20ºC. Las muestras congeladas deben alcanzar la temperatura ambiente y mezclarse bien antes de realizar la prueba.
 
 
MATERIALES
Materiales Suministrados:
   • Placas
   • Cuentagotas
   • Ficha técnica
Materiales Requeridos no Suministrados:
   • Contenedor para la recogida de la muestra
   • Cronómetro
 
 
INSTRUCCIONES DE USO
Permita que la prueba, la muestra de orina, y/o los controles estén a temperatura ambiente (15-30°C) antes de realizar la prueba.
1. Llevar a temperatura ambiente la bolsa del kit antes de abrirlo. Sacar la placa de la bolsa sellada y usarla lo antes posible.
2. Colocar la placa en una superficie limpia y lisa. Tomar con el gotero la muestra, y colocándolo en posición vertical, añadir 3 gotas de orina (100 µl) en el pocillo de la muestra (S) y poner el cronómetro en marcha. Evitar que queden atrapadas burbujas de aire en el pocillo de muestra.
3. Esperar a que aparezcan las líneas rojas. Los resultados deberán leerse a los 5 minutos. No interpretar resultados pasados 10 minutos.
 
 
INTERPRETACION DE RESULTADOS
Negativo:(*) Aparecen dos líneas. Una línea roja debe estar en la zona del control (C) y otra línea roja o rosa aparecerá en la zona de la prueba (T). Este resultado negativo indica que la concentración de Barbitúricos está por debajo del nivel detectable del cut-off.
NOTA: La intensidad del color rojo de la línea de la región de la prueba (T) puede variar, pero cualquier coloración roja, por muy débil que sea, deberá considerarse como resultado negativo.
Positivo: Una línea roja aparece en la región de control (C). No aparecerá ninguna línea en la zona de la prueba. Este resultado positivo indica que la concentración de Barbitúricos excede los niveles detectables.
No Válido: No aparece la línea de control. Un volumen de muestra insuficiente o un procedimiento incorrecto son las posibles razones de la ausencia de la línea de control. Revise el procedimiento y repita la prueba usando una nueva prueba. Si el problema persiste, deje de utilizar ese lote y contacte con su distribuidor local.
 
 
CONTROL DE CALIDAD
1. La Prueba BAR de Barbitúricos en Un Solo Paso en Placa (Orina) proporciona sólo un resultado analítico preliminar cualitativo. Debe emplearse un segundo método analítico para confirmar el resultado. Cromatografía de gases y Espectrometría de masas (GC/MS) son los métodos analíticos más apropiados para la confirmación.
2. Es posible que errores técnicos o de procedimiento, así como otras substancias que interfieren, presentes en la muestra de orina, pueden causar resultados erróneos.
3. Adulterantes como lejía y/o el alumbre en la muestra de orina, pueden producir resultados erróneos independientemente del método analítico usado. Si se sospecha adulteración, la prueba deberá repetirse con otra muestra de orina.
4. Un resultado positivo indica la presencia de la droga o de sus metabolitos, pero no indica el nivel de intoxicación, la vía de administración o la concentración de droga en la orina.
5. Un resultado negativo no necesariamente indica la ausencia de droga en la orina. Pueden obtenerse resultados negativos cuando la droga está presente pero en niveles inferiores a los del cut-off de la prueba.
6. La prueba no distingue entre drogas de abuso y determinados medicamentos.

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